奥沙利铂(oxaliplatin, Oxa) 是进展期结直肠癌化疗常用药物, 然而多数患者在接受治疗后出现耐药, 相关耐药机制尚未完全阐明。本研究以结直肠癌细胞HCT116为对象, 通过药物浓度梯度诱导构建奥沙利铂耐药细胞株(HCT116/Oxa)。在此基础上基于蛋白质组学分析HCT116/Oxa细胞表达谱; 采用The Database for Annotation, Visualization, and Integrated Discovery (DAVID) 数据库进行基因本体(gene ontolog, GO) 分析; 利用GeneAnalytics数据库通路富集分析; 通过抑制剂、免疫印迹、siRNA技术揭示结直肠癌细胞对奥沙利铂耐药的潜在靶标及其机制。结果显示, HCT116/Oxa细胞对奥沙利铂的耐药指数为10.2。与HCT116相比, HCT116/Oxa对奥沙利铂表现出强的增殖潜能和抗凋亡能力。蛋白质组数据表明, HCT116/Oxa细胞717种基因表达改变, 上调399种, 下调318种。GO分析显示, 差异表达基因与氧化压力反应、铁代谢、脂质代谢、凋亡、细胞周期进展等生物学过程有关。通路富集显示, 细胞代谢、铁死亡、Nrf2-ARE信号、脂肪酸及谷胱甘肽代谢等通路显著变化。定量结果显示, 与铁死亡相关分子, 包括谷胱甘肽过氧化物酶4 (glutathione peroxidase 4, GPX4)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(glutamate-cysteine ligase regulatory subunit, GCLM)、铁蛋白轻链(ferritin light chain, FTL)、铁蛋白重链(ferritin heavy chain, FTH1)、血红素氧合酶1 (heme oxygenase 1, HMOX1)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GSR) 和NADH脱氢酶1 (NADH dehydrogenase 1, NQO1) 的表达显著增加, 而长链脂肪酸-辅酶A连接酶(long chain fatty acid-CoA ligase, ACSL) 4和ACSL1的表达降低。功能研究表明, GPX4特异性抑制剂RSL3降低耐药细胞活力, 提高脂质过氧化水平, 增加亚铁离子和丙二醛含量, 降低谷胱甘肽(glutathione, GSH) 浓度。免疫印迹显示, HCT116/Oxa细胞中GPX4、FTH1、FTL、GSR表达增加, ACSL4降低。RSL3能够逆转GPX4、FTH1、FTL、GSR和ACSL4的水平。进一步发现, 敲低GPX4可降低耐药细胞活力, 提高脂质过氧化水平和降低GSH浓度, 表明GSH/GPX4通路介导的铁死亡抵抗是HCT116/Oxa对奥沙利铂耐药的潜在机制, 抑制GSH/GPX4通路是逆转结直肠癌对奥沙利铂耐药的途径。
现有物理和化学剂量计不能直接反映电离辐射对生物体的影响, 无法直接在体内检测辐射。以工程益生菌为核心的生物传感器安全、稳定, 可用于电离辐射体内检测。本文构建了用于电离辐射检测的口服工程化微生物传感器, 选用益生型大肠杆菌Escherichia coli Nissle 1917 (EcN) 作为底盘菌株, 通过CRISPR/Cas9基因编辑成功敲除EcN的隐秘质粒并得到ΔEcN。以SOS响应中recA启动子为辐射响应元件, 以荧光蛋白为报告元件设计辐射响应基因线路, 通过丝裂霉素C和γ射线诱导表达, 对不同基因线路的工程菌进行性能表征和优化, 获得优化的候选工程菌株。所有动物实验获得军事科学院军事医学研究院伦理委员会批准且实验均按照相关指导原则和规定进行(批准号: IACUC-DWZX-2022-521)。比较小鼠体内辐射检测性能, 筛选得到灵敏度更高的工程菌EC-8作为口服工程化微生物传感器。本研究利用合成生物学原理设计构建了口服工程益生菌, 虽然目前构建得到的工程益生菌仍存在局限性, 检测特异性及信噪比仍待进一步提高, 但该工程菌可在体内对电离辐射产生响应, 为体内电离辐射剂量检测提供了一种新方法, 有望成为用于辐射损伤精准诊断的活体生物药。
利用多种色谱技术从中药赤芝中分离得到4个化合物。经一维(1D)、二维(2D) 核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance spectroscopy, NMR) 等方法鉴定其均为新的羊毛脂甾烷型三萜, 并采用量子化学计算方法确定其绝对构型, 命名为baoslingzhines T~W (1~4)。
近几十年来, 药物化学家从自然界或化学合成得到了大量肽类化合物, 这些物质以高生物活性、低不良反应的特点引起了广泛的高度关注。然而, 直链多肽因其易受蛋白酶水解影响及膜通透性不佳等问题, 在药物开发领域面临诸多挑战。环肽凭借稳定的结构、高靶标结合亲和力及较低的毒性, 集天然多肽的高生物活性与小分子药物的良好药代动力学特性于一身, 能够很好地克服以上缺陷, 在新药研发中逐渐发挥着重要作用。本文聚焦于环肽药物的发展历程, 探讨了环肽的来源、获取方法以及近年来在药学领域的具体应用, 并对其未来的发展潜力进行了展望, 旨在为环肽的临床应用提供理论与实践基础。
采用MCI树脂、葡聚糖凝胶Sephadex LH 20、Flash C18制备色谱和半制备液相制备色谱等方法, 对西南凤尾蕨根部甲醇提取物进行较为系统的分离纯化, 通过质谱、红外光谱和核磁共振等方法, 对分离到的化合物进行结构鉴定。从西南凤尾蕨中分离鉴定了5个倍半萜类化合物, 分别为6,7-四氢吡喃环-(2S, 3S)-蕨素C-3-O-β-D-(6′-acetyl)-葡萄糖苷(1)、(2S, 3S)-蕨素C-3-O-β-D葡萄糖苷(2)、(2S)-蕨素A (3)、(2S)-13-羟基蕨素A (4) 和(2R, 3S)-2-羟基蕨素C (5)。其中, 化合物1为新的三环倍半萜, 化合物3~5首次从西南凤尾蕨中分离。体外生物活性实验表明, 化合物1能够抑制4T1和EMT6细胞增殖, 具有显著抗三阴性乳腺癌生物活性。
采用硅胶、MCI Gel CHP-20、Sephadex LH-20、ODS等色谱填料, 运用柱色谱、半制备液相色谱等分离技术, 对青蒿石油醚提取物的中性部位进行分离纯化, 通过高分辨质谱、核磁共振等波谱技术鉴定化合物的结构。从青蒿中分离鉴定了4个萜类化合物, 分别鉴定为(1S,4S,5R,6S,9R,10R)-4-ethoxy-9,10-dimethyloctahydrofuro-(3,2-i)-isochromen-11(4H)-one (1)、3a,4,5,6,6a,7-hexahydro-3,6-dimethyl-9-methyl-2H-naphtho[8a, 1-b]furan-2,8(3H)-dione (2)、kobusone (3) 和1,2-campholide (4)。其中化合物1为新化合物, 利用X-ray单晶衍射技术确定其绝对构型。化合物2为新天然产物, 化合物3和4为首次从蒿属植物中分离得到。
肺纤维化(pulmonary fibrosis, PF) 是一类预后极差、严重影响患者生存质量的肺部疾病, 其主要病理特征是肺泡壁周围组织瘢痕形成及增厚, 最终导致呼吸衰竭。目前, 美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration, FDA) 批准的PF治疗药物包括吡非尼酮和尼达尼布, 然而这两种药物仅能延缓疾病进程, 无法实现PF的逆转, 且二者均因价格昂贵以及多种不良反应导致临床应用受限。PF发病机制至今尚未完全阐明, 研究证明, 免疫细胞的异常激活和调控在PF中扮演着重要角色。本综述旨在探讨近年来免疫细胞在PF进程中的作用研究进展, 以期为新型免疫疗法的开发提供理论参考。
采用聚酰胺柱色谱、硅胶柱色谱、制备薄层色谱以及半制备高效液相色谱等分离技术, 对姜黄的95%乙醇提取物进行了分离纯化。随后, 运用高分辨质谱、红外、核磁共振等波谱技术对化合物进行了结构鉴定并通过计算ECD确定了新化合物的绝对构型。最终, 从姜黄中分离鉴定了2个没药烷型倍半萜, 分别为(7S)-1,3,5,10-没药烷四烯-3-硝基-9-酮(1) 和turmeronol A (2), 其中化合物1为新颖的硝基取代没药烷型倍半萜。
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